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高致病性禽流感疫情处置技术规范,农业部关于

作者: 农业政策  发布:2019-09-26

基本提醒:各州、自治区、直辖市种植业、农业垦殖、畜牧、农业、乡镇集团、农业机械化厅,广西生产建设兵团农业部: 《高致病性禽流行性胃疼疫情处置技艺专门的学问》已经2000年十月2日农业总局第7次常务会议审议通过,现印发你们,请依照推行。外省、自治区、直辖城市和农村业、农业垦殖、畜牧、农业、乡镇企业农机化厅,西藏生产建设兵团农业分公司:

发文单位:农业部

《高致病性禽流行性胸闷疫情处置技术行业内部》已经二〇〇二年六月2日农业根据地第7次常务会议审议通过,现印发你们,请依据实践。

文  号:农政发[2004]1号

二○○三年四月14日

公布日期:2004-2-3

高致病性禽流行性胃痛疫情处置技艺标准

奉行日期:2004-2-3

首先项样品采撷、保存及运输技能专业
采撷、保存和平运动载样品应当适合下列须要,并填写采集样品单。

生效日期:1900-1-1

一、样品采撷
病禽
1.至少从5只濒死禽采集样品。样品包涵:泄殖腔拭子和呼吸系统拭子各5个;气管和肺的混样5个,肠管及内容物的混样5个;肝、脾、肾和脑等集体样品各5个。
2.各自访问至少12个病的血样病死禽
无发病禽时,可从归西不久的病禽采集样品,采样需求同病禽。
棉拭子单独放入容器,容器中盛开含有抗素的pH值为7.0-7.4的PBS液。抗生素的精选视地方景况而定,社团和呼吸系统拭子悬液中投入欧霉素、达托霉素、制霉菌素。但大便和泄殖腔拭子所用的抗生素浓度应巩固5倍。插手抗生素后pH值应调至7.0-7.4。

各市、自治区、直辖城市和农村业、农业垦殖、畜牧、农业、乡镇公司、农机化厅(局、委),西藏生产建设兵团农业部:

二、样品保存和平运动输
血样要独立存放,不能够混合。
样品应密闭于塑料袋或瓶中,置于有制冷剂的容器中运输,容器必得密封,制止渗透。
样品若能在24钟头内送到实验室,冷藏运输。不然,应冷冻运输。
若样品临时不用,则应冷冻保存。

  《高致病性禽流行性感冒疫情处置能力标准(施行)》已经二〇〇三年6月2日农业局第7次常务会议审议通过,现印发你们,请依据推行。

采样单

  二00四年三月十七日

此单一式三份,第一联存根,第二联随样品,第三联由被采集样品单位保存

  高致病性禽流行性胃痛疫情处置本领专门的学业(实施)

其次项血清学会诊技术规范

  第一项 样品收集、保存及运输技巧专门的学业

一.血凝检验技术
资料准备
1.96孔V型微量反应板,微量移液器。
2.阿氏液、鸡红细胞悬液,配制方法见附录A。
3.pH7.2的0.01mol/L铝酸盐缓冲液。
4.高致病性禽流行性高烧病毒血凝素分型抗原和规范分型血清以及中性(neuter gender)血清。

  搜集、保存和平运动输样品应当符合下列要求,并填写采集样品单。

侦察在为数相当少反应板的1-12孔均步入0.025mLPBS,换滴头。
摄取0.025mL抗原加入第l孔,混匀。
从第1孔摄取0.025mL抗原参加第2孔,混匀后摄取0.025mL到场第3孔,如此进行对倍稀释至第11孔,从第11孔吸收0.025mL弃之,换滴头。
每孔再步入0.025mLPBS。
鸡红细胞悬液。
下静置40min后观望结果。对照孔红细胞将成分明的钮扣状沉到孔底。
结果剖断。将板倾斜,观看红细胞有无呈泪滴状流淌。完全血凝的抗体或病毒最高稀释倍数代表多少个血凝单位。

  一、样品搜罗

2.血凝抑制依照血凝试验结果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点,终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗体的稀释倍数。比如,假如血凝的极端滴度为1:256,则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64在为数相当的少反应板的1-11孔插手0.025mLPBS,第12孔参预0.05mLPBS。
吸收0.025mL血清参与第1孔内,充足混匀后吸0.025mL于第2孔,依次对倍稀释至第10孔,从第10孔吸收0.025mL弃去。
1-11孔均步入含4HAU混匀的病毒抗原液0.025mL,一般温度静置至少30min。
每孔参加0.025mL的鸡红细胞悬液轻轻混匀,静置约40min(平常的温度约20℃,若情形温度太高可置4℃条件下1hr),对照红细胞将呈显钮扣状沉于孔底。

  (一)病禽

结果剖断
以完全遏制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。
独有中性(neuter gender)对照孔血清滴度不抢先21og2,阴性对照孔血清引用误差不超越1个滴度,试验结果才使得。HI价小于或等于31og2剖断HI试验阴性;HI价等于41og2为中性(neuter gender)。

  1.起码从5只濒死禽采集样品。样品满含:泄殖腔拭子和呼吸系统拭子(置于缓冲液中)各5个(小珍禽可搜集新鲜粪便);气管和肺的混样5个,肠管及内容物的混样5个;肝、脾、肾和脑等团队样品(无法混样)各5个。

二.琼脂凝胶免疫扩散材质计划
1.硫柳汞溶液、pH7.2的0.01mol/LPBS溶液,配制方法见附录B。
2.琼脂板:制备方法见附录C。
3.禽流行性胃痛琼脂凝胶免疫扩散抗原、标准阳性和中性(neuter gender)血清。

  2.独家收载至少十三个病鸡的血样(慢性发病期血清)。

操作方法
1.打孔。在张罗的琼脂板上按7孔一组的春梅形打孔,孔径约5mm,孔距2mm-5mm,将孔中的琼脂用8号针头斜面向上从右左侧缘插入,轻轻向侧面方向将琼脂挑出,勿伤边缘或使琼脂层脱离皿底。
2.封底。用乙醇灯轻烤平皿尾巴部分至琼脂刚刚要融化截止,密闭孔的平底,避防侧漏。
3.加样。用一点点移液器或富含6~7号针头的0.25mL注射器,摄取抗原悬液滴入中间孔,标准阴性血清分别投入外周的①和④孔中,被检血清按编号挨个分别参与别的4个外周孔。每孔均以加满不溢出为度,每加一个样品应换二个滴头。
4.效能。加样实现后,静置5min~10min,然后将平皿轻轻倒寄放入湿盒内,37℃温箱中作用,分别在24h、48h和72h观看比赛并记录结果。

  (二)病死禽

结果判断
1.判别方法。将琼脂板置日光灯或侧焦点光下考查,若正式阳性血清与抗原孔之间出现一条清晰的铁蓝沉淀线,则试验创设。
2.论断标准
与主干抗原孔之间出现显著致密的沉淀线,且该线与抗体与正规阴性血清之间沉淀线的末尾相符合,则被检血清判为阴性。
与基本孔之间虽不出现沉淀线,但行业内部阴性血清孔的沉淀线一端向被检血清孔内侧盘曲,则此孔的被检样品判为弱中性(neuter gender)(凡弱阴性者应重新试验,仍为弱阴性者,判为中性(neuter gender))。
与宗旨孔之间不出新沉淀线,且职业阴性血清沉淀线直向被检血清孔,则被检血清判为阳性。
与中央抗原孔之间沉淀线粗而混浊或正式中性(neuter gender)血清与抗原孔之间的沉淀线交叉并直伸,被检血清孔为非特异反应,应重做,若仍出现非特异反应则判为中性(neuter gender)。

  无发病禽时,可从病逝不久的病禽采集样品,采集样品供给同病禽。

图1AGP试验结果

  棉拭子单独归入容器,容器中盛开含有抗菌素的pH值为7.0-7.4的 PBS液。抗生素的取舍视地点气象而定,组织和呼吸系统拭子悬液中参预克林霉素(2000IU/mL)、金霉素(2mg/mL)、氯霉素(50μg/mL)、制霉菌素(一千0IU/mL)。但大便和泄殖腔拭子所用的抗生素浓度应提升5倍。参与抗生素后pH值应调至7.0-7.4.

附录A
HA和HI试验用溶液的配制
1.阿氏液配制
葡萄糖2.05g
柠檬酸钠0.8g
柠檬酸0.055g
氯化钠0.42g
加蒸馏水至100mL,加热溶解后调pH值至6.1,69kPa15min高压灭菌,4℃保存备用。

  二、样品保存和平运动输

2.1%鸡红细胞悬液制备
征集至少3只SPF公鸡或无禽流行性咳嗽和新城疫等抗体的不奇怪化公鸡的血液与等容积阿氏液混合,用pH7.2的0.01mol/LPBS液洗濯3次,每一回均以1000r/min离心10min,洗濯后用PBS配成1%红细胞悬液,4℃保存备用。

  血样要单独存放,不能够混合。

附录B
AGP试验用溶液的配制
1.1%硫柳汞溶液的配制
硫柳汞1.0g
加蒸馏水至100mL
溶解后,置100mL瓶中盖塞存放备用。

  样品应密闭于塑料袋或瓶中,置于有制冷剂的容器中运输,容器必需密闭,幸免渗透。

2.pH7.2的0.01mol/LPBS的配制
配制25×PB:称量2.74g磷酸氢二钠和0.79g二水磷酸二氢钠加蒸馏水至100mL。
配制1×PBS:量取40mL25×PB,加入8.5g生理盐水,加蒸馏水至1000mL。
用氢氧化钠或乙酰胆碱调pH至7.2。
PBS一经使用,于4℃保存不抢先3周。

  样品若能在24时辰内送到实验室,冷藏运输。不然,应冷冻运输。

附录C
琼脂板的希图
称量琼脂糖1.0g,参预100mL的pH7.2的0.01mol/LPBS液,在水浴中煮沸使之充裕融化,出席8g生理盐水,丰盛溶解后踏向1%硫柳汞溶液1mL,冷至45℃-50℃时,将干净干热灭菌直径为90mm的平皿置于平台上,各样平皿加入18mL-20mL,加盖待确实后,把平皿倒置防止水分蒸发,放平日三门电冰箱中保留备用。

  若样品权且不用,则应冷冻(最好-70℃或以下)保存。

其三项高致病性禽流行性咳嗽确诊标准

                采样单
┏━━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓
┃样品名称    │                            ┃
┠────────┼────────────────────────────┨
┃样品编号    │                            ┃
┠────────┼────────┬────────┬──────────┨
┃采样基数    │        │采集样品数量    │          ┃
┠────────┼────────┼────────┼──────────┨
┃采集样品日期    │        │保存情状    │冷冻(藏)     ┃
┠────────┼────────┴────────┴──────────┨
┃被采集样品单位   │                            ┃
┠────────┼────────────────────────────┨
┃通讯地址    │                            ┃
┠────────┼────────┬────────┬──────────┨
┃联系电话    │        │邮政编码      │          ┃
┠────────┼────────┼────────┼──────────┨
┃        │        │        │          ┃
┠────────┴────────┼────────┴──────────┨
┃被采集样品单位盖章或签订       │采集样品单位盖章 采集样品人签订        ┃
┃                 │                   ┃
┃ 年  月  日         │                   ┃
┃                 │年  月  日            ┃
┠─────────────────┴───────────────────┨
┃备注:                                  ┃
┗━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛
  
  此单一式三份,第一联存根,第二联随样品,第三联由被采集样品单位保存

一、检查判断指标
医治会诊目的
1.慢性发病去世;
2.脚鳞出血;
3.鸡冠出血或发绀、尾部口疮;
4.肌肉和其余团队器官广泛性严重流血。

  第二项 血清学检查判断本事职业

血清学会诊指标
1.H5或H7的血凝抑制效价达到24及以上;
2.禽流行性胃疼琼脂免疫扩散。

  一。 血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验技能

病原学检查判断指标
1.H5或H7亚型病毒分离阳性;
2.H5或H7特异性分子生物学会诊阴性;
3.任何亚型病毒静脉内接种致病指数超越1.2。

  (一)材质准备

二、结果判定
医治猜疑为高致病性禽流行性脑仁疼
切合临床检查判断目的1,且至少有治疗会诊指标2、3、4之一。
疑似高致病性禽流行性咳嗽
相符结果判别,且符合血清学会诊目的1或/和2。
,且至少切合病原学检查判断指标1、2、3之一。

  1. 96孔V型微量反应板,微量移液器(配有滴头)。

第四项封锁才干标准
一、由所在地畜牧兽医行政管制部门划定疫点、疫区、受威逼区。
二、封锁令的公告:畜牧兽医行管机关请示本级人民政坛对疫区进行封锁,人民政党在吸收报告后,应马上做出决定。决定实践封锁的,发表封锁令。
三、封锁的实践:本地人民政党协会对疫区实行封锁。在疫区四周设置警示标记,在进出疫区的通行路口创立不时检疫消毒站,指派专人,配备消毒设施,禁止易沾染活禽进出和易沾染禽类产品运出,对出入人士和车子展开严加消毒。
四、封锁令的排除:疫区内存有禽类及其产品按规定管理后,经过21天以上的监测未出现新的传染源,且受恫吓区病原检验中性(neuter gender),经动物防止瘟疫监督人士查证过关后,由本地畜牧兽医行政管制机关向发表封锁令的人民政党申请解除封锁。

  2. 阿氏(Alsevers)液、鸡红细胞悬液,配制方法见附录A.

第五项扑杀技艺专门的工作
扑杀活禽可利用如下方法:
一、窒息
先将待扑杀禽装入袋中,置入密闭车或任何密闭容器,通入二氧化碳窒息致死;或将禽装入密封袋中,通入二氧化碳窒息致死。
二、扭颈
扑杀量较时辰使用。依据禽只大小,六头手握住尾部,另三头手握住体部,朝相反方向扭转拉伸。
三、其它
也可依靠地面情况,采取任何能幸免病原扩散的致死方法。

  3. pH7.2的0.01mol/L硅酸盐缓冲液(PBS)。

第六项无毒化处理技巧专门的学问
负有病死禽、被扑杀禽及其产品、排放物以及被污染或只怕被污染的垫料、饲料和其他物料应当进行无毒化管理。
无害化管理能够选拔深埋、焚化、焚烧等艺术,饲料、粪便也足以发酵管理。

  4. 高致病性禽流行性脑仁疼病毒血凝素分型抗原和行业内部分型血清以及中性(neuter gender)血清。

一、深埋
1.深埋点应隔开居住地区、水源和交通要道,避开公众视界,清楚标示。
2.坑的遮盖土层厚度应超过1.5米,坑底铺垫生石灰,覆盖土以前再撒一层生石灰。坑的地方和项目应有支持防洪。
3.禽鸟尸体放到坑中后,浇点火,然后用土覆盖,与相近持平。填土不要太实,以防尸腐产气形成气泡冒出和液体渗漏。
4.饲料、污染物等置于坑中,喷洒消毒剂后掩埋。

  (二) 操作方法

二、焚化、焚烧
1.疫区相近有重型焚尸炉的,可接纳焚化的法子。
2.处理的遗骸和污染物量小的,可以挖1.5米深的坑,浇油焚烧。

  1. 血凝(HA)试验(微量法)

三、发酵
饲料、粪便可在内定地方聚积,密封发酵。
以上管理应顺应环境保护须求,所提到到的运送、装卸等环节要幸免洒漏,运输装卸工具要彻底消毒。

  (1)在为数十分的少反应板的1-12孔均参预0.025mL PBS,换滴头。

第七项疫区洗刷消毒本领专门的职业
一、创设洗涤消毒队
保洁消毒队应有一名专门的学问本事人士教导。

  (2)吸收0.025mL抗原参加第l孔,混匀。

二、设备和须要品
清洗工具:扫帚、叉子、铲子、锹和洗涤用水管。
消毒工具:喷雾器、火焰喷射枪、消毒车辆、消毒容器等。
消毒剂:醛类、氧化剂类、氯制剂类、双季胺盐类等方便的消毒剂。
防护器材:防护服、口罩、胶靴、手套、护目镜等。

  (3)从第1孔摄取0.025mL抗原到场第2孔,混匀后吸收0.025mL加盟第3孔,如此进行对倍稀释至第11孔,从第11孔吸收0.025mL弃之,换滴头。

三、养禽场清理、洗刷和消毒
第一清理垃圾、粪便、饲料、垫料等。
对地方和各样用具等彻底洗刷,并用水洗涤禽舍、车辆等,对所发出的污水进行无毒化管理。
养禽场的金属设施设备的杀菌,可使用火焰、薰蒸等方法消毒。
养禽场圈舍、场馆、车辆等,可采纳消毒液喷洒的法子消毒。
养禽场的草料、垫料等作深埋、发酵或点火管理。
大便等废品作深埋、积聚密闭发酵或点火处理。
疫点内办公区、喂养职员的宿舍、公共酒店、道路等地方,要喷发消毒。污水沟可投放生石灰或漂白粉。

  (4)每孔再参加0.025mL PBS.

四、交通工具清洗消毒
出入疫点、疫区的交通要道设立有时消毒点,对进出职员、运输工具及有关物品举行消毒。
疫区内具有或许被传染的火箭应严酷消毒,车辆的外场、内部及持有犄角和缝隙都要用干净的水清洗,用消毒剂消毒,不留死角。
车子上的物料也要盘活消毒。
从车辆上清理下来的废料和粪便要作无毒化管理。

  (5)每孔均投入0.025mL 1%(V/V)鸡红细胞悬液(将鸡红细胞悬液丰硕摇匀后出席)。

五、家养动物市镇和笼具的洗涤消毒
饲料和大便等要深埋、发酵或点火。
刮擦和漱口笼具等全体货物,并深透消毒。所发生的污水要作无毒化管理。

  (6)振荡混匀,在平常的温度(20℃-25℃)下静置40min后观望结果(假诺条件温度太高,可置4℃境况下1hr)。对照孔红细胞将成鲜明的钮扣状沉到孔底。

六、屠宰加工、贮藏等场地的涤荡消毒
具备家养动物及其制品都要深埋或点火。
禽舍、笼具、过道和舍外区域要洗濯,并用消毒剂喷洒。
怀有器具、桌子、冰箱、地板、墙壁等要洗濯干净,用消毒剂喷洒消毒。所用服装用消毒剂浸润后洗濯干净,别的物料都要用适当的章程开展消毒。
如上所爆发的污水要作无害化管理。

  (7)结果判别。将板倾斜,观看红细胞有无呈泪滴状流淌。完全血凝(不流动)的抗体或病毒最高稀释倍数代表三个血凝单位(HAU)。

第八项散养户养殖场合和禽舍消毒手艺要求
一、扑杀鸡等禽鸟后,场所必需洗刷消毒。
二、在保洁消毒从前要穿戴好防护服装。
三、禽舍中的粪便应通透到底清除,院子里散落的禽粪应当搜聚,并作聚成堆密封发酵或点火管理。
四、清理堆成堆禽粪时应淋水,不得扬起粪尘。
五、用消毒剂深透消毒场馆和禽舍,用过的民用防卫物品如手套、塑料袋和口罩等应销毁。
六、可重复使用的货品须用去污剂洗濯两回,确认保证干净。
七、将扑杀时穿过的衣衫用70℃以上的沸水浸透5分钟以上,再用肥皂水洗濯,在日光下晾晒。
八、处理垃圾后要洗手、洗澡。

  2. 血凝抑制(HI)试验(微量法)

第九项扑杀禽鸟专门的工作职员防护手艺供给
一、穿戴合适的严防衣装
穿防护服,也许穿长袖手术衣再加一件防水围裙。
戴N95口罩或正式手术用口罩。
穿可消毒的胶靴,或许一回性的鞋套。

  (1)依照血凝试验结果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点,终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗体的稀释倍数。举例,假诺血凝的终端滴度为1:256,则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64(256除以4)。

二、洗手和消毒
密切接触感染禽鸟的人手,要用肥皂洗手。
禽鸟扑杀和运输人士在操作截至后,要用消毒水洗手。

  (2)在为数非常的少反应板的1-11孔加入0.025mL PBS,第12孔参与0.05mL PBS.

三、健康监测
具有暴露于感染禽鸟和疑惑禽场的职员均招待受卫生部门监测。
并发呼吸道感染症状的扑杀人士和禽场工人应及早接受卫生部门检查。
上述职员的妻儿也招待受正规监测。
免疫性机能低下、伍拾八虚岁以上和有冉冉心脏和肺部病痛的职员要防止从事与禽接触的劳作。
有关人口和兽医迎接受血清学监测。

  (3)吸取0.025mL血清出席第1孔内,充足混匀后吸0.025mL于第2孔,依次对倍稀释至第10孔,从第10孔吸收0.025mL弃去。

第十项赴疫区考查搜集人士防护本事供给
一、需备物品
乳胶手套
一回性帽子或头套
乙醇棉球或消毒纸巾
管理污染物的大塑料袋

  (4)1-11孔均步向含4HAU混匀的病毒抗原液0.025mL,一般温度(约20℃)静置至少30min.

二、防护需要
要戴口罩,口罩不得交叉使用,用过的口罩不得自由舍弃。
进去禽粪污染的地点必需穿胶靴,用后要清洗消毒。
脱掉个人民防空卫器材后要洗手或擦手。
若有希望,应当洗浴,越发是出入有禽粪灰尘的场馆。
垃圾要装入塑料袋内,置于钦点地方。

  (5)每孔加入0.025mL的鸡红细胞悬液轻轻混匀,静置约40min(常温约20℃,若碰到温度太高可置4℃条件下1hr),对照红细胞将呈显钮扣状沉于孔底。

第十一项喂养人士防护工夫须求
一、喂养人士与染疫禽鸟或粪便等污染货物接触前,必需戴口罩、手套和护目镜,穿防护服和胶靴。
二、若散养户喂养人士未有那一个防护道具,要尽大概变通使用别的物料替代。如用布掩饰口鼻代替口罩,用塑料袋德阳和脚,可洗濯的东西裹在身上等。
三、参预拍卖禽鸟及有关洗刷消毒职业的,应穿戴好防护物品。
四、地方洗濯消毒落成后,脱掉防护物品要洗手、洗澡。
五、服装须用70℃以上的滚水浸润5分钟,再用肥皂水洗刷,于阳光下曝晒。
六、销毁一遍性手套、塑料袋和其它连锁货物。
七、胶靴和护目镜等要洗涤消毒。
八、处理完上述货物要洗手。
九、小孩子不得加入上述职业。

  (三)结果决断

本消息仅供参考,使用前请核查。

  以完全遏制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。

  唯有中性(neuter gender)对照孔血清滴度不抢先21og 2,阴性对照孔血清基值误差不超过1个滴度,试验结果才有效。HI价小于或等于31og2决断HI试验中性(neuter gender);HI价等于41og 2为阴性。

  二、琼脂凝胶免疫性扩散(AGID)试验

  (一)材质计划

  1. 硫柳汞溶液、pH7.2的0.01mol/L PBS溶液,配制方法见附录B.

  2. 琼脂板:制备方法见附录C.

  3. 鸡新城疫琼脂凝胶免疫性扩散抗原、规范阴性和阴性血清。

  (二)操作方法

  1. 打孔。在张罗的琼脂板上按7孔一组的春梅形打孔(中间1孔,附近6孔),孔径约5mm,孔距2mm-5mm,将孔中的琼脂用8号针头斜面向上从右左侧缘插入,轻轻向侧面方向将琼脂挑出,勿伤边缘或使琼脂层脱离皿底。

  2. 封底。用乙醇灯轻烤平皿尾巴部分至琼脂刚刚要融化甘休,密闭孔的底部,避防侧漏。

  3. 加样。用少些移液器或富含6~7号针头的0.25mL注射器,摄取抗原悬液滴入中间孔(图1的⑦号),标准中性(neuter gender)血清分别投入外周的①和④孔中,被检血清按编号挨个分别加入别的4个外周孔(图1的②,③,⑤,⑥号孔)。每孔均以加满不溢出为度,每加叁个样品应换三个滴头。

  4. 职能。加样完结后,静置5min~10min,然后将平皿轻轻倒存放入湿盒内,37℃温箱中功能,分别在24h、48h和72h调查并记下结果。

  (三)结果推断

  1. 料定方法。将琼脂板置日光灯或侧高光下考查,若正式阴性血清(图1的①和④号孔)与抗原孔之间出现一条清晰的鼠灰沉淀线,则试验创立。

  2. 推断规范

  (1)若被检血清孔(如图第11中学的②号)与主干抗原孔之间出现显著致密的沉淀线,且该线与抗体与专门的学业中性(neuter gender)血清之间沉淀线的末尾相切合,则被检血清判为阴性。

  (2)被检血清孔(如图第11中学的③号)与主导孔之间虽不出现沉淀线,但标准中性(neuter gender)血清孔(如图第11中学的④号)的陷落线一端向被检血清孔内侧屈曲,则此孔的被检样品判为弱阴性(凡弱中性(neuter gender)者应重新试验,仍为弱中性(neuter gender)者,判为阴性)。

  (3)若被检血清孔(如图第11中学的⑤号)与基本孔之间不出现沉淀线,且专门的学业中性(neuter gender)血清沉淀线直向被检血清孔,则被检血清判为中性(neuter gender)。

  (4)被检血清孔(如图1中的⑥号)与主导抗原孔之间沉淀线粗而混浊或规范阴性血清与抗原孔之间的沉淀线交叉并直伸,被检血清孔为非特异反应,应重做,若仍出现非特异反应则判为中性(neuter gender)。

  图1 AGP试验结果(略)

  附录A:HA和HI试验用溶液的配制

  1.阿氏(Alsevers)液配制

  葡萄糖          2.05g

  柠檬酸钠         0.8g

  柠檬酸          0.055g

  氯化钠          0.42g

  加蒸馏水至100mL,加热溶解后调pH值至6.1,69kPa 15min高压灭菌,4℃保存备用。

  2.1%鸡红细胞悬液制备

  收罗至少3只SPF公鸡或无禽流行性脑仁疼和新城疫等抗体的正规公鸡的血液与等容积阿氏液混合,用pH7.2的0.01mol/L PBS液洗刷3次,每一趟均以一千r/min离心10min,洗涤后用PBS配成1%(V/V)红细胞悬液,4℃保存备用。

  附录B:AGP试验用溶液的配制

  1.1%硫柳汞溶液的配制

  硫柳汞            1.0g

  加蒸馏水至          100mL

  溶解后,置100mL瓶中盖塞存放备用。

  2.pH7.2的0.01mol/L PBS 的配制

  (1)配制25×PB:称量2.74g磷酸氢二钠和0.79g二水磷酸二氢钠加蒸馏水至100mL.

  (2)配制1×PBS:量取40mL25×PB,参与8.5g生理盐水,加蒸馏水至一千mL.

  (3)用氢氧化钠或泛酸调pH至7.2.

  (4)灭菌或过滤。

  (5)PBS一经使用,于4℃保存不超过3周。

  附录C:琼脂板的张罗

  称量琼脂糖1.0g,加入100mL的pH7.2的0.01mol/L PBS液,在水浴中煮沸使之丰盛融化,参加8g生理盐水,丰盛溶解后到场1%硫柳汞溶液1mL,冷至45℃-50℃时,将清新干热灭菌直径为90mm的平皿置于平台上,各样平皿参与18mL-20mL,加盖待凝固后,把平皿倒置避防水分蒸发,放常常三门双门电冰箱中保存备用(时间不超过2周)。

  第三项 高致病性禽流行性脑仁疼确诊标准

  一、检查判断目的

  (一) 临床检查判断指标

  1.慢性发病驾鹤归西;

  2.脚鳞出血;

  3.鸡冠出血或发绀、底部久咳;

  4.肌肉和别的团队器官普及性严重流血。

  (二)血清学检查判断目的

  1.H5或H7的血凝抑制(HI)效价到达24及以上;

  2. 禽流行性咳嗽琼脂免疫性扩散(AGP)试验阴性(水禽除了这几个之外)。

  (三)病原学检查判断目标

  1.H5或H7亚型病毒分离中性(neuter gender);

  2.H5或H7 特异性分子生物学检查判断阴性;

  3. 另外亚型病毒静脉内接种致病指数(IVPI)大于1.2.

  二、结果判定

  (一)临床疑惑为高致病性鸡瘟

  切合临床检查判断指标1,且至少有诊疗会诊指标2、3、4之一。

  (二)疑似高致病性禽流行性头痛

  适合结果剖断(一),且切合血清学检查判断目的1或/和2.

  (三)确诊

  相符结果决断(二),且至少切合病原学会诊目标1、2、3之一。

  第四项 封锁本领专门的学业

  一、由所在地畜牧兽医行政管理单位划定疫点、疫区、受威逼区。

  二、封锁令的颁发:畜牧兽医行政管制部门请示本级人民政党对疫区进行封锁,人民政党在接收报告后,应立即做出决定。决定执行封锁的,公布封锁令。

  三、封锁的施行:本地人民政党协会对疫区施行封锁。在疫区四周设置警示标识,在进出疫区的畅通路口创立偶然检疫消毒站,指派专人,配备消毒装置,禁止易沾染活禽进出和易沾染禽类产品运出,对出入职员和车辆张开严加消毒。

  四、封锁令的铲除:疫区内具有禽类及其制品按规定管理后,经过21天以上的监测未出现新的传染源,且受勒迫区病原检查评定阴性,经动物防止瘟疫监督职员核查合格后,由地点畜牧兽医行政管制部门向发表封锁令的人民政党申请解除封锁。

  第五项 扑杀才能职业

  扑杀活禽可应用如下方法:

  一、窒息

  先将待扑杀禽装入袋中,置入密封车或任何密闭容器,通入二氧化碳窒息致死;或将禽装入密闭袋中,通入二氧化碳窒息致死。

  二、扭颈

  扑杀量较时辰使用。根据禽只大小,一只手握住底部,另三只手握住体部,朝相反方向扭转拉伸。

  三、其它

  也可依附地面情形,采纳其余能防止病原扩散的致死方法。

  第六项 没有害化管理技能专门的工作

  全部病死禽、被扑杀禽及其制品、排泄物以及被污染或大概被传染的垫料、饲料和另外货色应当开展没有害化管理。

  无毒化管理能够选用深埋、焚化、点火等艺术,饲料、粪便也足以发酵管理。

  一、深埋

  1.深埋点应远远地离开居住地、水源和交通要道,避开民众视线,清楚标示。

  2.坑的掩饰土层厚度应超越1.5米,坑底铺垫生石灰,覆盖土在此以前再撒一层生石灰。坑的职责和类别应有助于防洪。

  3.禽鸟尸体放到坑中后,浇油点火,然后用土覆盖,与周围持平。填土不要太实,防止尸腐产气变成气泡冒出和液体渗漏。

  4.饲料、污染物等置于坑中,喷洒消毒剂后掩埋。

  二、焚化、焚烧

  1.疫区附近有重型焚尸炉的,可利用焚化的办法。

  2.管理的遗骸和污染物量小的,可以挖1.5米深的坑,浇油焚烧。

  三、发酵

  饲料、粪便可在钦点地方聚成堆,密闭发酵。

  以上管理应相符环境保护供给,所涉嫌到的运载、装卸等环节要防止洒漏,运输装卸工具要通透到底消毒。

  第七项 疫区洗濯消毒技巧专门的工作

  一、创制洗刷消毒队

  洗涤消毒队应有一名职业能力人士教导。

  二、设备和日用品

  (一)洗涤工具:扫帚、叉子、铲子、锹和洗印用水管。

  (二)消毒工具:喷雾器、火焰喷射枪、消毒车辆、消毒容器等。

  (三)消毒剂:醛类、氧化剂类、氯制剂类、双季胺盐类等合适的消毒剂。

  (四)防护道具:防护服、口罩、胶靴、手套、护目镜等。

  三、养禽场清理、清洗和杀菌

  (一)首先清理垃圾堆、粪便、饲料、垫料等。

  (二)对该地和各样用具等通透到底洗濯,并用水清洗禽舍、车辆等,对所发出的污水实行无毒化管理。

  (三)养禽场的金属设施设备的杀菌,可使用火焰、薰蒸等方法消毒。

  (四)养禽场圈舍、场面、车辆等,可采纳消毒液喷洒的主意消毒。

  (五)养禽场的饲草、垫料等作深埋、发酵或点火管理。

  (六)粪便等杂质作深埋、积聚密闭发酵或点火管理。

  (七)疫点内办公区、饲养职员的宿舍、公共酒店、道路等场面,要喷洒消毒。

  (八)污水沟可投放生石灰或漂白粉。

  四、交通工具清洗消毒

  (一)出入疫点、疫区的交通要道设立不常消毒点,对出入职员、运输工具及有关货物进行消毒。

  (二)疫区内具有恐怕被污染的运载火箭应严厉消毒,车辆的外面、内部及全数犄角和缝隙都要用干净的水洗濯,用消毒剂消毒,不留死角。

  (三)车辆上的物料也要办好消毒。

  (四)从车辆上清理下来的垃圾和大便要作无毒化管理。

  五、家畜市镇和笼具的洗刷消毒

  (一)用消毒剂喷洒全数区域。

  (二)饲料和大便等要深埋、发酵或点火。

  (三)刮擦和洗刷笼具等具备货物,并彻底消毒。所发出的污水要作无毒化管理。

  六、屠宰加工、贮藏等场馆的涤荡消毒

  (一)全体家畜及其制品都要深埋或点火。

  (二)禽舍、笼具、过道和舍外区域要洗涤,并用消毒剂喷洒。

  (三)全数器材、桌子、双门双门电冰箱、地板、墙壁等要洗涤干净,用消毒剂喷洒消毒。

  (四)所用服装用消毒剂浸透后漱痛经净,其余货物都要用适当的章程开展消毒。

  (五)以上所发生的污水要作没有害化管理。

  第八项 散养户养殖场面和禽舍消毒技能供给

  一、扑杀鸡鸭等禽鸟后,场馆必得洗涤消毒。

  二、在保洁消毒从前要穿戴好防护服装。

  三、禽舍中的粪便应彻底清除,院子里散落的禽粪应当搜集,并作堆成堆密闭发酵或焚烧管理。

  四、清理堆叠禽粪时应淋水,不得扬起粪尘。

  五、用消毒剂深透消毒场馆和禽舍,用过的个人民防空范物品如手套、塑料袋和口罩等应销毁。

  六、可重复使用的货色须用去污剂冲洗一回,确定保障干净。

  七、将扑杀时穿过的衣衫用70℃以上的热水浸润5秒钟以上,再用肥皂水洗濯,在太阳下晾晒。

  八、管理放弃物后要洗手、洗澡。

  第九项 扑杀禽鸟工作人士防护本领必要

  一、穿戴合适的防备衣服

  (一)穿防护服,也许穿长袖手术衣再加一件防水围裙。

  (二)戴可消毒的橡皮手套。

  (三)戴N95口罩或规范手术用口罩。

  (四)戴护目镜。

  (五)穿可消毒的胶靴,只怕叁回性的鞋套。

  二、洗手和消毒

  (一)紧凑接触感染禽鸟的人口,要用肥皂洗手。

  (二)禽鸟扑杀和平运动载人士在操作结束后,要用消毒水洗手。

  三、健康监测

  (一)全体揭露于感染禽鸟和思疑禽场的人口均招待受卫生部门监测。

  (二)出现呼吸系统感染症状的扑杀人士和禽场工人应赶紧接受卫生部门检查。

  (三)上述人员的亲属也应接受健康监测。

  (四)免疫性效果低下、五十八周岁以上和有放慢心脏和肺部病魔的人手要防止从事与禽接触的劳作。

  (五)相关人口和兽医接待受血清学监测。

  第十项 赴疫区调查搜罗职员防护本领需要

  一、需备货品

  (一)口罩

  (二)乳胶手套

  (三)防护服

  (四)叁回性帽子或头套

  (五)胶靴

  (六)乙醇棉球或消毒纸巾

  (七)管理污染物的大塑料袋

  二、防护供给

  (一)要戴口罩,口罩不得交叉使用,用过的口罩不得私行扬弃。

  (二)必需穿防护服。

  (三)步入禽粪污染的地点必需穿胶靴,用后要冲洗消毒。

  (四)脱掉个人民防空御器具后要洗手或擦手。

  (五)若有相当的大恐怕,应当洗浴,尤其是进出有禽粪灰尘的场子。

  (六)甩掉物要装入塑料袋内,置于钦赐地址。

  第十一项 喂养职员防护手艺须要

  一、饲养人员与染疫禽鸟或大便等污染货色接触前,必须戴口罩、手套和护目镜,穿防护服和胶靴。

  二、若散养户喂养人士并未有那一个防护器材,要尽大概变通使用其他货物代替。如用布掩饰口鼻替代口罩,用塑料袋唐山和脚,可清洗的东西裹在身上等。

  三、参加管理禽鸟及有关洗濯消毒专业的,应穿戴好防护物品。

  四、场馆洗刷消毒完结后,脱掉防护货物要洗手、洗澡。

  五、衣裳须用70℃以上的白热水浸泡5分钟,再用肥皂水清洗,于阳光下曝晒。

  六、销毁一回性手套、塑料袋和另外连锁货品。

  七、胶靴和护目镜等要冲洗消毒。

  八、管理完上述物品要洗手。

  九、小孩子不得参与上述职业。

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